高效液相色譜儀（HPLC）原理及應(yīng)用

1.高效液相色譜儀原理--簡介

高效液相色譜儀也叫高壓液相色譜、高速液相色譜、高別離度液相色譜等，它是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來的。它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送活動相，故又稱高壓液相色譜。又因剖析速度快而稱為高速液相色譜。

色譜法的別離原理是：溶于活動相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過固定相時，因為與固定相(station phase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強弱不同，在固定相中滯留時刻不同，然后先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。

高效液相色譜法的使用規(guī)模十分廣泛，對樣品的適用性廣，不受剖析目標揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的約束，幾乎所有的化合物包括高沸點、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用高效液相色譜法剖析測定，因而彌補了氣相色譜法的缺乏。在現(xiàn)在已知的有機化合物中，可用氣相色譜剖析的約占20% ，而80% 則需用高效液相色譜來剖析。

因為HPLC剖析不受溫度和樣品沸點約束，因此具有更廣闊的使用潛力。經(jīng)過30多年的迅速發(fā)展，高效液相色譜法在基礎(chǔ)理論、儀器裝置和色譜柱等方面的研討已趨于成熟，現(xiàn)已成為化學化工、環(huán)境、藥學、食物等多個領(lǐng)域中*具優(yōu)勢的別離剖析辦法之一。

液相色譜依據(jù)別離機理的不同可分為：

液固吸附色譜

液液分配色譜

離子交換色譜

離子對色譜法

分子排阻色譜(或凝膠滲透色譜)

（一）液-固吸附色譜

活動相為液體，固定相為固體吸附劑，依據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來別離物質(zhì)。

（二）液-液分配色譜

活動相和固定相都是液體的色譜法即為液-液色譜，是利用樣品組分在兩種不相溶的液相間的分配來進行別離。一種液相為活動相，另一種是涂于載體上的固定相。

（三）離子交換色譜

（四）離子對色譜法